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【環凱原創】有趣的細菌拉絲試驗 — 快速區分革蘭氏陽性菌和陰性菌

點擊次數：122 發布時間：2023-06-30

是否有想知道平板上的分離菌的到底是革蘭氏陰性還是陽性菌，卻因沒有革蘭氏染色或沒有顯微鏡或不會革蘭氏染色操作而不知所措？或者，革蘭氏染色后還不確定標本測試菌是革蘭氏陰性還是陽性菌的？ 下面給大家介紹個簡單又有趣的解決方法 —— 細菌拉絲試驗，不需染色劑不需顯微鏡，一分鐘輕松區分革蘭氏陽性菌和陰性菌。 此法在1970年Smith【1】首先報道應用去氧膽酸鈉溶液做拉絲試驗區分弧菌與非弧菌（如氣單胞菌屬細菌），初步鑒別霍亂弧菌；1981年Shushan等【2】和1983年Agbonlahor等【3】相繼應用氫氧化鉀溶液做拉絲試驗區分革蘭氏陽性菌和陰性菌。 目前國內細菌拉絲試驗主要也是應用于兩個方面：一是用于霍亂弧菌初步鑒別【4】，二是用于區分革蘭氏陽性菌和陰性菌【5-8】。 區分革蘭氏陽性菌和陰性菌的拉絲試驗方法【6】：取一張洗凈玻片， 滴加25g/L氫氧化鉀水溶液一滴，根據菌落大小，從平板上挑取單個菌落或數個純培養菌落，置于氫氧化鉀滴液中研磨，經15-60秒， 自混懸液中輕輕提起接種環，仔細觀察；60秒內混懸物中形成黏液狀并可拉成細絲（5mm以上）為陽性（對應是革蘭氏陰性菌），60秒混懸物均勻不出現細絲者為陰性（對應是革蘭氏陽性菌）。 為什么會是這樣的結果？ 目前有兩種說法，第一種說法是革蘭氏陰性菌的細胞壁在稀堿氫氧化鉀溶液中容易裂解，裂解后釋放出DNA，使氫氧化鉀溶液變為粘稠并形成粘絲，反之，稀氫氧化鉀對此革蘭氏陽性菌無此作用【5】；第二種說法是與細胞壁化學結構有關，在氫氧化鉀作用下革蘭氏陰性菌的細胞壁中所含的脂多糖、脂蛋白及脂質被皂化而形成粘稠物，致拉絲試驗陽性，而革蘭氏陽性菌細胞壁主要成分是粘肽，氫氧化鉀不能使其形成粘稠物，故拉絲試驗陰性。革蘭氏陰性經過氫氧化鉀溶液處理后再革蘭氏染色鏡檢，發現菌體細胞壁溶解，呈模糊絮片狀，細胞壁有不同程度的損傷，接種適宜培養基上不能生長繁殖，而革蘭氏陽性菌無此現象【6-7】。 其實，這兩種說法都是認為與革蘭氏陽性和陰性菌細胞壁結構成分有關，所以此法可用于區分革蘭氏陽性和陰性菌。但至于粘稠的物質是DNA還是革蘭氏陰性菌細胞壁類脂物質被氫氧化鉀皂化形成的，要闡明還有待進一步的研究。 拉絲試驗區分革蘭氏陽性菌和陰性菌的準確性：相關研究報道表明【6-8】，氫氧化鉀拉絲試驗結果與革蘭氏染色一致，二者符合率為100%。拉絲試驗不但能正確區別革蘭氏陰性菌和陽性菌，還有助于復核革蘭氏染色結果的正確性，也是革蘭氏染色質控的有力措施。 但拉絲試驗結果也會受到試劑、菌量、菌型等因素影響【6】，所以為了保證該試驗結果的準確，操作時需注意： 1）氫氧化鉀溶液的濃度在20-50g/L較佳【8】，濃度過低會出現假陰性結果； 2）挑取菌量多少也很重要，菌落直徑1.5-3mm，取1/2-1個菌落，如菌落直徑小于1mm，取2-3個菌落，菌量過少反應遲緩甚至出現假陰性結果； 3）光滑（S）型與粗糙(R）型菌落進行試驗， R型革蘭氏陰性菌雖能出現拉絲現象但比S型革蘭氏陰性菌慢，且菌量過少時呈陰性反應，因此，對于R型菌落的菌量宜相應多取。 參考文獻： 1,Smith HL Jr. A Presumptive test for vibros: The “String" Test. Bull WHO,1970,42:817. 2,Shushan H.快速區分革蘭氏陽性與陰性厭氧菌的輔助方法。國外醫學：微生物學分冊，1982，1：47. 3,Agbonlahor DE, Odugbemi Phd To,Udofia PO. Differentiation of Gram-Positive and Gram-Negative Bacteria and Yeasts Using a Modification of the “String" Test. Amer J Med Techn,1983,49:177. 4,衛生部《霍亂防治手冊》第六版(2013年) 5,張崑. 應用氫氧化鉀法區分革蘭氏陰、陽性細菌的探討. 中國醫科大學學報 1983年12卷4期:97. 6,解曉珍，田洪明，舒亦平，潘紹武.細菌拉絲試驗的應用探討. 第三軍醫大學學報,1995年第17卷第1期：67-68. 7,張素萍，路高社. 拉絲試驗的應用及其影響因素的觀察. 北京軍qu醫藥 1995年第7卷第4期:312-313. 8,王秀芹.氫氧化鉀拉絲試驗與革蘭氏染色的應用比較. 齊魯醫學檢驗，2004年第15卷第3期：54.